Agarose 젤 만들때, 젤 용액을 얼마나 준비해야 할까요?
4.5mm 두께의 젤을 만들기 위해, mini tray (5.2 x 5.9 cm)는 15ml의 용액이, wide tray (10.7 x 5.9 cm)는 30ml의 용액이 필요합니다.
Agarose gel을 부었더니, tray가 구부러 집니다. 왜 그런건가요?
뜨거운 용액을 바로 부을 경우 tray가 구부러 집니다. 붓기전에 65-70도에서 젤 용액을 식힌뒤 이용하세요.
Tray에 젤용액이 남아있는데 전기영동에 영향이 없나요?
적은양의 gel solution은 tray 밑으로 빠지기 때문에 gel을 내리는 데에는 지장이 없습니다.
Agarose gel을 만든뒤 보관은 어떻게 하나요?
running buffer로 적신 paper towel과 함께 밀폐시켜서 casting system에 넣어 (함께 제공되는) 뚜껑을 덮어두어 1주일간 냉장보관하여 사용할수 있습니다.
가끔 RunOne Cell 탱크에 running buffer을 부은 후, running platform위에 gel tray를 올려놓으면 뜨는 경우가 있습니다.
그럴 경우에는 gel을 platform에 고정시키기 위해, gel tray를 끌어내려 눕힌 후 살짝 옆으로 고정시키면 됩니다.
가끔 샘플이 well에 제대로 loading되지 않는데 이유가 무엇인가요?
한가지 가능성은 sample buffe 밀도가 충분하지 않아서 그럴 수 있습니다.
가끔 casting stand에서 polyacrylamide gel tray와 cover을 빼낼때, 공기방울이 gel과 tray사이나 gel과 tray cover사이에 생기는 경우가 있습니다.
이게 gel을 내리는 데에는 영향을 미치지 않나요?
공기 방울은 gel tray를 casting stand에서 빼낼때 생겨난 것이며, 그것들이 gel을 running 하는데에는 영향을 끼치지 않습니다.
전기영동 시간이 생각했던 것보다 더 오래 걸리는 이유가 무엇인가요?
Running buffer의 농도가 적당하지 않기 때문입니다. Salt 농도가 너무 높으면 더 높은 전류가 요구되고 따라서 lower voltage gradient와 longer run time의 원인이 됩니다.
Horizontal Polyacrylamide gel을 만들때, 3mm보다 더 얇게 만들어도 되나요?
Polyacrylamide gel tray와 cover 사이가 3mm이기 때문에 더 얇게 만들면, 이사이로 산소가 들어가 acrylamide의 polymerization을 방해합니다.
Mini gel을 만들 경우 12ml, wide gel을 만들 경우 24ml의 acrylamide solution을 부어주면 됩니다.
Polyacrylamide gel을 casting시, cover를 gel solution위에 끌어내릴때 공기 방울이 cover와 gel solution에 생기면 어떻해야 하나요?
제공되는 약수저를 이용하여 cover를 gel solution으로 비스듬히 천천히 끌어내려 주세요.
Gel (특히 높은 percentage의 polyacrylamide gel)을 가끔 casting stand에서 빼내기기 힘들때가 있어요. 왜그런 건가요?
Gel 용액 중 소량이 gel tray의 밑으로 들어가서 casting stand에 가볍게 붙어있게 됩니다.
그럴때에는 gel tray의 두 양쪽 tab을 안쪽으로 당겨주면서(gel의 가운데쪽으로), gel tray를 위로 빼내어 stand에서 빼내면 됩니다.
Power supply가 플러그에 꽂혀있는데도 power supply keypad의 오른쪽 밑에 있는 녹색 LED창에 불이 켜지지 않습니다.
만약 녹색 LED에 불이 켜지지 않을 경우에는 뚜껑, running tank와 power supply lid가 잘 맞는지 확인해주세요.
다 맞게 위치해 있는 경우에도 불구하고 창에 불이 들어오지 않으면 저희 고마바이오텍으로 연락주세요.
Running하는 동안, 빨간 voltage indicator LED가 계속 on and off로 깜빡거리는 이유는 무엇인가요?
안전 한계인 400mA를 초과하여, RunOne power supply가 꺼진 것입니다.
Running buffer를 맞게 준비했는지 농도가 맞게 희석되었는지 한번 체크해 주세요.
전기영동을 하는 동안, bromophenol blue와 xylene cyanol dye가 gel에서 앞으로 이동하질 않습니다.
그럴때에는 RunOne장치에서 뚜껑에 표시되어 있는데로 DNA가 (-) → (+)에서 이동할 수 있도록 gel의 well 위치가 tank 오른쪽, power supply옆에 위치하도록 놓아져 있는지 확인해주세요.
Gel을 염색한 후에, 샘플의 밴드가 전혀 보이지 않습니다.
만약 standard가 적당히 염색되었다면 염색 과정을 조금더 늘려보세요.
그래도 여전히 샘플이 보이지 않는다면 그건 샘플안에 DNA가 충분한 양이 들어있지 않기 때문일 수 있습니다.
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