EzWay™ Antibody Erasing Buffer

• Western Blot후 membrane에 부착된 primary/secondary antibody를 1step으로 제거하는 용액입니다.
• chemiluminescence를 이용한 western blot에 사용할 수 있습니다.
• 동일 membrane상에 재반응(reprobing, immunoprobing, rehybridization)을 다른 종류의 여러 항체로 반복 실험할 수 있습니다.
• 상온에서 5-15분이면 antibody가 membrane에서 제거 됩니다.
• 항원에 전혀 손상을 주지 않습니다.
• 실온에서 1년간 보관 가능합니다.

1. Erasing Buffer에 antibody를 제거할 membrane을 넣는다.
2. Erasing Buffer에 들어있는 membrane을 강하게 흔들면서 상온에서 5-15분 정도 반응시킨다.
3. Erasing Buffer를 버린다.
4. 300ml의 증류수로 강하게 흔들면서 세척해준다.
5. 4의 단계를 5번 반복해준다.
6. 만약 signal이 확인되면 membrane을 다시 Erasing Buffer에 넣고 5-15분 더 추가로 반응 시킨다.
7. Membrane에 immunodetection reagent가 없는 것이 확인된 후에는 그 다음 immunoprobing을 할 수 있다.
8. Reblocking된 membrane으로 그 다음 immunoprobing을 시작한다.

사용예
Stripping immunoblot with erasing Buffer and Reprobing the immunoblot
(첫번째 실험 후 erasing Buffer로 제거한 후 첫번째와 다른 항체로 두번째 실험한 결과 사진)
Stripping of Western Blot by Antibody erasing Buffer and rewestern blot:
A. HeLa extract를 10% SDS-PAGE에서 전기영동한후 NC membrane으로 transfer를 시켰다. membrane은 1% fat-milk로 1시간동안 blocking하였고 15분 washing과 5분간 TBST 처리를 두번 반복하였다. 사용된 항체는 anti-actin이었으며 anti-rabbit IgG:HRP를 이용하여 ECL을 수행하였다.
B. A에서 수행했던 immunoblot을 Antibody Erasing Buffer에 7분간 담아둔뒤 5분간 5번씩 세척하였다. stripping이 끝난뒤, immunoblot을 ECL용액에 적신뒤 film에 60분동안 노출하면서 관찰하였으나 signal은 생기지 않았다. 즉 깨끗이 stripping이 되었음을 보여준다.
C. B에 blocking을 거쳐 anti-eIF2alpha 항체를 반응시키고 여기에 anti-rabbit IG:HRP 2차 항체를 붙혀서 ECL을 관찰하였다. 그림과 같이 stripping후 두번째 항체를 이용하여 reprobing이 가능함을 확인할수 있다. (*) Marks are unspecific detections.

• Phospho Antibody Stripping Solution
• ReBlot™ Plus Antibody Stripping Solution & Recycling Kit