1. PBMC는 어떻게 준비되나요?
PBMC는 전혈 혹은 Leukopak으로부터 수집되고 분리됩니다. 여기를 클릭하여 자세한 PBMC 수집 프로토콜을 확인하세요.
2. PBMC는 어떤 tube를 사용하여 수집하나요?
PBMC는 일반적으로 Sodium Heparin 튜브를 이용하여 수집됩니다. 하지만 요청시 시중에 나와 있는 모든 혈액 채취 튜브를 사용할 수도 있습니다.
3. PBMC는 어떻게 보관 및 운송되나요?
PBMC는 액체 질소에 담아 운송되며, 수령 시 즉시 사용하거나 장기 보관을 위해 액체 질소 증기상(vapor phase)에 보관해야 합니다.
4. PBMC의 세포 수 및 생존율은 어떻게 결정되나요?
세포 수 및 생존율은 acridine orange와 propidium iodide를 사용하여 살아있는 핵 세포와 죽은 핵 세포를 각각 식별하는 Nexcelom Cellometer®를 사용하여 결정됩니다. 세포 잔해가 발생하기 쉬운 해리된 조직과 달리, PBMC는 트립판 블루 배제(trypan blue exclusion) 방법으로 카운팅 할 수 있습니다. 유세포 분석법(flow cytometry)을 사용하여 세포 수 및 생존율을 결정하는 경우, 동결 보존된 PBMC에 존재하는 혈소판을 제거하기 위해 적절한 FSC 역치(threshold)를 설정하는 것이 권장됩니다.
5. PBMC와 MNC의 차이점은 무엇입니까?
Discovery Life Sciences에서는 PBMC(Peripheral Blood Mononuclear Cells, 말초혈액 단핵구 세포)는 전혈(whole blood)에서 분리된 세포를 의미하며, MNC(Mononuclear Cells, 단핵구 세포)는 성분채집술(apheresis) 재료에서 분리된 세포를 나타냅니다. 성분채집술 과정에서는 과립구(granulocytes), 적혈구, 혈소판이 검체에서 감소되며, 처리 과정에서 추가로 제거됩니다. 따라서 MNC는 전혈 PBMC에 비해 혈소판 수치가 현저히 낮습니다.
6. PBMC에는 어떤 항응고제를 사용합니까?
PBMC는 항응고제로 Sodium Heparin을 사용하여 채취됩니다. 요청 시 EDTA 및 sodium citrate와 같은 대체 항응고제를 사용할 수 있습니다.
7. 질환이 있는 PBMC 및 BMMC 샘플에 대해 아세포(blast) 비율을 확인할 수 있습니까?
질환이 있는 PBMC 및 BMMC 샘플은 아세포 비율을 설정하는 데 사용된 초기 샘플과 다른 날짜에 채취되는 경우가 있습니다. 따라서 DLS는 질환이 있는 샘플의 아세포 비율을 보장할 수 없습니다. 그러나 AML 및 다발성 골수종 BMMC의 경우, DLS는 동결 보존 후 아세포 비율을 특성화하기 위해 유세포 분석법을 수행하며, 이 결과는 샘플 선택에 도움이 되도록 제공됩니다.
8. PBMC 해동 후 QC(품질 관리)는 어떻게 수행됩니까?
액체 질소에 최소 24시간 보관한 후, 한 vial을 꺼내 37°C 수조에서 작은 얼음 결정만 남을 때까지 빠르게 해동합니다. 바이알을 생물 안전 작업대(biosafety cabinet)로 옮기고, Nexcelom Cellometer와의 선형성(linearity)을 보장하기 위해 15ml conical tube에 적절한 양의 DMEM/F12 + 10% FBS로 희석합니다. 세포 현탁액 20µl와 acridine orange와 propidium iodide 20µl를 혼합하여 Nexcelom Cellometer에서 세포 수 및 생존율을 측정합니다. 모든 세포 계수는 샘플을 펠렛화하거나 세척하기 전에 수행됩니다. 이 계수는 총 생존 세포 수율의 추정치입니다.
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