1. NucView® Caspase-3 Substrates는 어떤 실험에 사용되나요?
NucView® caspase-3 substrate는 caspase-3/7 인식 서열(DEVD)에 결합하는 새로운 형광 DNA 염색 dye 입니다. 처음에는 형광이 없으나 원형질막을 통과하여 세포내로 유입된 후 세포가 사멸하는 동안 caspase-3/7에 의해 절단되면 DNA에 친화성이 있는 염료가 방출되어 핵을 염색합니다.
결과적으로 NucView® caspase-3 substrate는 caspase-3/7의 활성을 감지하고, 세포 사멸 동안 핵의 형태학적 변화를 시각화 할 수 있습니다.
2. NucView® Caspase-3 Substrates는 Caspase-3에 얼마나 특이적인가요?
다른 caspase-3 기질과 마찬가지로, NucView® 488 Caspase-3 Substrate는 caspase-7에 의해서도 절단될 수 있는 DEVD 서열을 기반으로 합니다.
3. NucView® Caspase-3 Substrates는 어떤 세포에 테스트되었나요?
NucView로 테스트된 primary cell과 불멸화 세포주 목록은 여기를 클릭하여 확인하세요.
4. NucView® Caspase-3 Substrates는 얼마나 안정적인가요?
매우 안정적입니다. 일부 사용자는 NucView® 488 Caspase-3 Substrate를 사용하여 4-5일 동안 타임 코스 분석을 수행했다고 보고했습니다.
5. NucView® Caspase-3 기질은 (PFA 또는 메탄올로) 고정된 세포나 조직 동결 절편에 사용할 수 있나요?
NucView® Caspase-3 기질은 활성 의존적입니다. 즉, 활성 capase-3 효소가 필요합니다. 죽었거나 고정되고 보존된 세포 또는 조직 절편에는 활성 caspase가 없으므로 이러한 기질을 사용할 수 없습니다. 고정된 세포 및 조직에서 세포자멸사(apoptosis) 검출에 적합한 TUNEL 분석 키트도 제공합니다. 이 키트는 세포자멸사 세포의 특징인 DNA 가닥 절단을 단일 단계 형광 TUNEL 표지하기 위해 당사의 매우 밝고 광안정성 있는 CF® 염료에 접합된 dUTP를 사용하며, 형광 현미경 또는 유세포 분석을 통한 분석에 적합합니다.
6. NucView® Caspase-3 Substrate는 언제 세포에 첨가해야 하나요?
NucView® Caspase-3 Substrate는 실험 시작 시 또는 끝에 세포에 첨가할 수 있습니다. 다른 세포자멸사(apoptosis) 분석법과 비교했을 때 NucView® Caspase-3 Substrate의 주요 장점은 실시간으로 caspase-3 활성을 모니터링하는 데 사용할 수 있다는 것입니다.
7. NucView® Caspase-3 Substrate 염색 후 면역 염색(immunostaining)을 위해 고정할 수 있나요?
네, 할 수 있습니다. 2-4% 파라포름알데하이드(paraformaldehyde)로 10-15분 동안 부드럽게 고정하는 것을 권장합니다. 과도하게 고정하면 신호가 감소할 수 있습니다. NucView® 488 염색은 0.1% Triton X-100으로 투과화(permeabilization)하는 것을 견딜 수 있습니다. 메탄올 고정은 권장되지 않습니다.
8. NucView® Caspase-3 Substrate는 유세포 분석기(flow cytometry) 또는 마이크로플레이트 리더(microplate readers)와 호환되나요?
네, 그렇습니다. NucView® Caspase-3 Substrate는 적절한 여기(excitation) 및 방출(emission) 설정을 가진 유세포 분석기 및 기타 장비와 호환됩니다.
9. NucView® Caspase-3 Substrate를 조직 염색에도 사용할 수 있나요?
NucView® Caspase-3 Substrate는 살아있는 조직 염색에 대해 Biotium에서 검증되지 않았습니다. 하지만, 살아있는 제브라피시(zebrafish) 배아 염색에 NucView® 488 Caspase-3 Substrate를 성공적으로 사용했다는 고객 피드백을 받은 적은 있습니다. NucView® Caspase-3 Substrate는 고정된 세포나 조직에는 사용할 수 없습니다.
10. 현미경으로 NucView® Caspase-3 Substrate를 얼마나 오래 모니터링할 수 있나요?
모든 형광 기반 프로브와 마찬가지로 시간이 지남에 따라 탈색(bleaching)이 발생합니다. 현미경으로 NucView® 염색을 얼마나 오래 볼 수 있는지는 초기 신호 강도와 여기(excitation) 광원의 강도를 포함한 여러 요인에 따라 달라집니다. 일부 사용자는 NucView®를 4-5일 동안 모니터링했다고 보고했습니다. 여기에서 24시간 동안 NucView® 염색의 타임랩스 비디오를 볼 수 있습니다.
11. NucView® 488 키트와 NucView® 488 기질의 차이점은 무엇인가요?
라이브 세포용 NucView® 488 Assay Kit (#30029)는 DMSO에 0.2 mM 농도의 NucView® 488 기질과 caspase-3 억제제 Ac-DEVD-CHO를 포함하고 있습니다. 키트 분석에서 최종 DMSO 농도가 상당히 높을 수 있으며, 이는 민감한 세포 유형에는 바람직하지 않습니다. 이 때문에 저희는 고객이 분석에서 DMSO 양을 조절할 수 있도록 DMSO에 1 mM 농도의 NucView® 488 Caspase-3 Substrate (#10402)와 PBS에 1 mM 농도의 제품 (#10403)을 제공합니다. 참고로, DMSO에 민감하지 않은 세포 유형에서는 기질 배양 중 DMSO를 추가하면 NucView® 염색이 향상될 수 있습니다.
또한 DMSO에 파란색 형광 NucView® 405 (#10405) 및 PBS에 파란색 형광 NucView® 405 (#10407), 그리고 DMSO에 주황색 형광 NucView® 530 (#10406) 및 PBS에 주황색 형광 NucView® 530 (#10408)도 제공합니다.
12. 억제제인 DEVD-CHO가 NucView® 염색을 억제하지 않는 것 같은데 왜 그런가요?
DEVD-CHO는 가역적 억제제이며 caspase-3 활성을 충분히 차단하지 못할 수 있습니다. 실험 시작 시(세포자멸사 유도 전 또는 유도 시점) DEVD-FMK와 같은 비가역적 억제제를 추가하는 것이 caspase 활성을 더 효과적으로 억제할 수 있습니다.
13. 다른 caspase용 NucView® 기질이나 다른 형광 염료 색상의 제품이 있나요?
현재 녹색 (오리지널 NucView® 488), 파란색 (NucView® 405), 주황색 (NucView® 530)으로 제공되고 있습니다. 다른 색상의 NucView®는 개발 중입니다.
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