[R&D Systems] 유전자 도입을 위한 non-viral TcBuster mRNA Transposase & Transposon | 고마바이오텍

• TcBuster는 여러 개의 관심 유전자를 세포내로 전달하고 안정적으로 삽입할 수 있는 대용량 Transposon 시스템입니다. 
• TcBuster는 CAR T 또는 CAR NK와 같은 세포 치료제 개발 과정에서 상당한 시간과 비용 절감을 제공합니다.
• TcBuster 시스템은 바이러스 대신 electroporation 방법을 사용하여 유전자를 삽입합니다. 

TcBuster 시스템이 바이러스 기반 시스템과 다른 점 

• 세포 치료제의 시장 출시 기간 단축 및 비용 절감
• 증가된 cargo capacity, 높은 편집 효율, 단일 벡터에서 여러 유전자 전달
• 위험성이 낮은 삽입 프로파일을 통한 안정적인 DNA 발현
• RUO 및 GMP 등급 재료 모두에 대한 강력하고 안정적인 공급
• 배치 간 변동성 감소 및 바이러스 전처리 없이 연구 단계부터 임상 및 상업 단계까지 손쉽게 확장 가능
• 유연하고 비독점적인 라이선스 옵션과 탄탄한 기술 및 규제 지원

 TcBuster Reagent 

TcBuster 원리 

서로 다른 크기의 cargo를 여러가지 electroporation 기기를 이용하여 효과적으로 T cell에 도입하였습니다.  

TcBuster로 유전자가 편집된 CD19-CAR-T 세포는 낮은 E:T 비율에서도 CD19+ 표적 세포를 선택적으로 제거하였습니다.

3명의 공여자로부터 얻은 T 세포는 유전 조작 후, GMP 등급의 T 세포 배지(Catalog # CCM038-GMP-1L)에 5% hAB 혈청과 IL-7, IL-15 각각 10 ng/mL를 보충하여 6 well G-Rex®에서 7일간 배양하였습니다.

(A) TcBuster는 electroporation 플랫폼에 관계없이 다양한 크기의 유전물질을 효율적으로 삽입하며, 그 결과 유사한 수의 유전자 변형 T 세포를 생성합니다.

(B) 5.1 kb 플라스미드로 조작된 T 세포는 electroporation 후 7일간 배양한 뒤 CS10에 냉동 보관하며, 해동 즉시 CD19+ 또는 CD19− 표적 세포에 다양한 E:T 비율로 처리한 결과, 24시간 공동 배양 후 CD19+ 세포의 성장을 효과적으로 억제합니다.

TcBuster로 유전적으로 조작된 primary T 세포의 유전적 특성을 분석한 결과, 삽입 양상이 양호하고 낮은 벡터 copy number를 보였습니다.

(A) 세 명의 공여자로부터 얻은 T 세포는 배양 9일 후 채취하여, Digital PCR을 통해 평균 보정 벡터 사본 수(VCN)를 분석하였습니다. 

(B) 삽입 부위 분석(Integration Site Analysis, ISA)은 TcBuster 또는 렌티바이러스를 사용하여 다양한 크기의 플라스미드를 도입한 세 명의 공여자 T 세포를 대상으로 수행하며, DNA 라이브러리는 GeneWerk(ProtaGene)에서 Illumina 시퀀싱으로 분석하였습니다.

TcBuster는 렌티바이러스와 동등하거나 더 높은 효율로  T 세포를 편집합니다.

세 명의 공여자로부터 얻은 T 세포는 GMP 등급의 Human T Cell Media에 5% hAB 혈청과 IL-7, IL-15 각각 10 ng/mL를 보충하여 6 well G-Rex®에서 9일간 배양하였습니다. GOI는 유전체에 삽입된 프로모터와 유전자를 의미합니다. 그래프는 TcBuster와 렌티바이러스를 사용한 유전자 조작의 효율을 비교한 것으로, TcBuster가 동등하거나 더 높은 편집 효율을 보임을 나타냅니다. 데이터 포인트는 세 명의 공여자로부터 얻은 평균값과 표준편차(±SD)를 기준으로 합니다.